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紫外分光光度計的入門知識講解
發(fā)布日期：2017-03-23 瀏覽次數(shù)：1891
紫外分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
分光光度計要測量的樣品必須是均一的溶液，不能有沉淀，如果有沉淀的話就要搖勻。而分光光度法則是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該物質進行定性和定量分析。
常用的波長范圍為：200～400nm的紫外光區(qū)；400～760nm的可見光區(qū)；2.5～25μm的紅外光區(qū)。
所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度，所有儀器應按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定，定期進行校正檢定。
單色光輻射穿過被測物質溶液時，被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比，其關系如下式：1 A=log—=ECL T；式中A為吸收度；T為透光率；E為吸收系數(shù)，采用的表示方法是(E1％1cm),即吸收度換算成溶液濃度為1％(g/ml)，液層厚度為1cm的數(shù)值；C為100ml溶液中所含被測物質的重量，g(按干燥品或無水物計算）；L為液層厚度，cm。
物質對光的選擇性吸收波長，以及相應的吸收系數(shù)是該物質的物理常數(shù)。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數(shù)后,可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區(qū)，除某些物質對光有吸收外，很多物質本身并沒有吸收,但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時應用標準品或對照品同時操作。
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